細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)于做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的老師而言，可以算是簡(jiǎn)單又常用的分析儀器之一了。但看似簡(jiǎn)單的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，也可能讓使用者為之抓狂。

曾收到一位做工藝開(kāi)發(fā)的老師反饋，他使用的一款細(xì)胞計(jì)數(shù)儀三次檢測(cè)同一個(gè)樣品，每次分析結(jié)果和平均值的偏差都超出正常可接受范圍。
這么簡(jiǎn)單的儀器為何會(huì)出現(xiàn)這種問(wèn)題

是否是儀器本身的性能問(wèn)題

如果您手頭已有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在使用，如何來(lái)判定這款細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的重復(fù)性和準(zhǔn)確性呢？

根據(jù)《定量細(xì)胞計(jì)數(shù)方法性能的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)分析（ISO20391-2:2019）》一文中，關(guān)于細(xì)胞計(jì)數(shù)方法性能判定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，建議至少做4個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度梯度至少做3次重復(fù)性測(cè)試。我們可以考慮使用該方法來(lái)評(píng)判手上細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的性能好壞，具體的細(xì)胞選擇和樣品制備上可以參考ISO20391-2:2019里面的具體描述。

在此，我們拿Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和另一款半自動(dòng)插板式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀分別進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性的性能評(píng)估。

這里檢測(cè)用到的是一種腫瘤細(xì)胞，按4個(gè)濃度梯度稀釋?zhuān)ㄔ海?倍，5倍和10倍稀釋?zhuān)?，并且每個(gè)濃度做3組重復(fù)性檢測(cè)，以下是測(cè)試得到的結(jié)果和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

針對(duì)同一個(gè)樣品的4個(gè)不同稀釋倍數(shù)和3組重復(fù)性檢測(cè)，同時(shí)使用半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（通常需要使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板作為載體，同時(shí)臺(tái)盼藍(lán)染色需要手動(dòng)完成）檢測(cè)是怎樣的效果呢？如下表所示是一款半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上檢測(cè)得到的數(shù)據(jù)。

由于半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀裝機(jī)后很久未做過(guò)標(biāo)樣的驗(yàn)證和校準(zhǔn)，所以和全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的測(cè)試結(jié)果之間的差異在此不做比較分析。

為了能比較得出這兩臺(tái)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的重復(fù)性和準(zhǔn)確性的性能水平，我們將每臺(tái)儀器3次原液檢測(cè)（編號(hào)：S3-原液）得到的活細(xì)胞密度平均值作為“真值"。那么Vi-CELL BLU得到的“真值"是3.44M，而半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀得到的“真值"是3.06M。而其他3個(gè)稀釋倍數(shù)下計(jì)算得到的平均結(jié)果，都分別和這個(gè)“真值"進(jìn)行比較，并且計(jì)算得到相對(duì)偏差。

通過(guò)分析我們可以看到隨著S3樣品的稀釋倍數(shù)不斷增加，Vi-CELL BLU的活細(xì)胞密度平均值偏差也逐漸變大，但都在±10%的偏差范圍內(nèi)。同時(shí)每個(gè)稀釋倍數(shù)下的3次重復(fù)性檢測(cè)RSD都小于5%，顯示出良好的測(cè)試結(jié)果重復(fù)性。

而半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)5倍和10倍稀釋的樣品檢測(cè)，3次測(cè)試結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差已經(jīng)大于10%，并且稀釋10倍的活細(xì)胞密度平均值和原液“真值"結(jié)果比較，偏差達(dá)到了15.03%。所以，半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的重復(fù)性檢測(cè)上相對(duì)要差很多，并且隨著稀釋倍數(shù)增加，檢測(cè)得到的結(jié)果和原液結(jié)果之間的偏差加大。

通過(guò)以上這種性能檢測(cè)方法，我們可以得出無(wú)論是在3次測(cè)試的重復(fù)性，還是梯度稀釋結(jié)果的準(zhǔn)確性，Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀都比半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀更有優(yōu)勢(shì)。如果您對(duì)自己使用的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀性能感興趣，也可以嘗試用這個(gè)方法來(lái)檢測(cè)判斷。

至于為何Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在重復(fù)性檢測(cè)和梯度稀釋的測(cè)試準(zhǔn)確性上，都比半自動(dòng)插片式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀更有優(yōu)勢(shì)？下一期的內(nèi)容，我們將針對(duì)這個(gè)問(wèn)題為您做具體的介紹。